Résumé

Les objectifs

Le but de cette étude était de déterminer l'effet antiviral in vitro du miel sur le virus varicelle-zona.

Méthodes

Des miels de manuka et de trèfle ont été utilisés à des concentrations allant de 0 à 6 % poids/volume. Un isolat clinique de VZV a été obtenu à partir d'une vésicule zoster et utilisé à faible passage. Diverses concentrations de miel de manuka et de trèfle ont été ajoutées au milieu de culture tissulaire des cellules de mélanome malin humain (MeWo) infectées par le VZV.

Résultats

Les deux types de miel ont montré une activité antivirale contre le virus du zona varicelle-zona avec une CE50 approximative de 4,5 % (mt/vol).

Conclusions

Nos résultats ont montré que le miel a une activité anti-VZV in vitro significative. Comme le miel est pratique pour l'application cutanée, qu'il est facilement disponible et peu coûteux, le miel peut être un excellent remède pour traiter les éruptions cutanées dues au zona dans les pays en développement où les médicaments antiviraux sont chers ou difficiles à obtenir.

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Introduction

Le zona (zona) est la réactivation du virus de la varicelle et du zona à partir de la latence dans les ganglions crâniens, les ganglions autonomes et les ganglions rachidiens, caractérisée par une éruption cutanée et une douleur intense dans les dermatomes atteints. Le zona est une maladie qui touche plus d'un million de personnes par an aux États-Unis. Le zona est particulièrement répandu dans les pays pauvres en développement, peut-être à cause de la malnutrition, des maladies chroniques et de l'inefficacité des programmes de vaccination[2]. Les patients atteints de zona dans les pays pauvres sont plus susceptibles de développer des complications telles que la névralgie post-zostérienne (NPZ), l'herpès-zona ophtalmique, la vascularite, la méningite et la myélite. Les agents thérapeutiques antiviraux VZV efficaces pour traiter la réactivation du VZV, comme l'acyclovir, le famcyclovir et le valacyclovir, sont très coûteux dans les pays en développement et ne sont pas facilement disponibles. Il y a un grand besoin d'un remède peu coûteux et facilement disponible dans les pays en développement.

Depuis l'antiquité, le miel a été utilisé pour traiter de nombreuses maladies. À l'heure actuelle, il a été démontré que le miel possède une excellente activité antibactérienne pour de nombreux agents pathogènes des plaies[4-8]. Le miel possède une excellente activité antibactérienne contre le Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline (SARM) et diverses espèces de pseudomonas communément associées aux infections des plaies et des brûlures. Les pansements au miel sont couramment utilisés pour traiter les infections de la peau et les brûlures. Les miels possèdent aussi une activité antifongique. Le miel a une activité antivirale contre le virus de la rubéole[17], et le miel est utilisé localement pour traiter les lésions récurrentes de l'herpès simplex. Dans cette étude, nous avons évalué l'activité antivirale de deux types de miel contre un isolat clinique du virus zona-varicelle[18].

Matériaux et méthodes

Culture cellulaire

Des cellules de mélanome malin humain (MeWo) ont été cultivées à 37°C et 5% de CO2 dans le milieu essentiel minimal de Dulbecco complété avec 10% de sérum foetal bovin (DMEM, Life Technologies, Carlsbad CA). La lignée cellulaire MeWo a été établie à partir d'une biopsie cutanée d'un mélanome malin et est la lignée cellulaire standard utilisée pour la propagation du VZV[19].

Stock de virus

Le virus varicelle-zona (VZV) obtenu à partir d'une vésicule zostérienne et dont on a démontré qu'il était de souche européenne a été utilisé avant le 20e passage in vitro[20] Comme le VZV est fortement associé aux cellules, le virus a été propagé par co-culture de cellules infectées avec des cellules non infectées selon des rapports variant de 1:4 à 1:100, selon son usage. Les stocks de VZV ont été préparés en utilisant des rapports d'infection de 1:100 et des expériences dose-effet ont été effectuées à des rapports d'infection de 1:4. [21].

Traitement au miel

Le trèfle pur et le miel de Manuka obtenus commercialement ont été dilués à une concentration finale allant de 0 % à 6 % (poids/vol) dans un milieu de culture et stérilisés par filtration.

Essai de viabilité cellulaire

La viabilité cellulaire dans diverses concentrations de miel a été déterminée par un essai neutre d'absorption rouge. En bref, après 3 jours de culture, les cellules MeWo ont été incubées pendant 3 heures avec 40 ug/ml de rouge neutre (Sigma, St. Louis, MO) dans du DMEM, fixé dans 0,5% de formaldéhyde, 1% de CaCl2 pendant 1 min, dissous dans 50% d'éthanol, 1% d'acide acétique pendant 5 min et une densité optique à 560 nm déterminée sur trois échantillons.

Essai d'infectivité

Les cellules MeWo infectées par le VZV et les cellules MeWo non infectées ont été incubées dans un milieu de culture contenant diverses concentrations de miel. Après la formation de la plaque (3 jours après l'infection), les cultures ont été fixées dans du formaldéhyde à 4 %, perméabilisées pendant 10 minutes dans du méthanol/acétone (50:50 ; v/v) et lavées en profondeur avec une solution saline tampon Tris (TBS ; 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, NaCl 150 mM). Les plaques de VZV ont été identifiées par immunocoloration. Brièvement, les monocouches ont été bloquées pendant 60 minutes dans 3 % des cas pendant 60 minutes dans 3 % de BSA dans le TBS, incubées pendant 60 minutes avec un anticorps primaire (lapin anti-IE63 : dilution 1:1 000)[23] puis incubées pendant 60 minutes avec un anticorps secondaire conjugué à la phosphatase alcaline (IgG anti lapin ; dilution 1:10 000 ; Abcam, Cambridge, MA). L'immunocoloration a été visualisée avec NBT/BCIP (Pierce, Rockford IL). Entre toutes les incubations, les cultures ont subi un lavage intensif au SCT. Les plaques ont été comptées à l'aide d'un microscope de dissection (grossissement 4 ×).

Résultats et discussion

Le miel de trèfle et le miel de Manuka sont facilement solubles dans l'eau, et à de faibles concentrations inhibent l'absorption du rouge neutre en quantités égales. Les cellules MeWo dans les deux concentrations de miel ≤ 3,75% ont montré des pentes de survie égales (Fig. 1). Ceci est très probablement dû à des actions osmotiques non spécifiques des sucres. Les deux types de miel ont une activité anti-VZV in vitro dépendante de la concentration, la moitié de la concentration efficace maximale (CE50) étant d'environ 4,5 % (mt/vol) (Fig. 2). Le miel de Manuka a montré une CE50 légèrement inférieure à celle du miel de trèfle. À la concentration EC50, les cellules sont restées viables. Des concentrations plus élevées de miel ont entraîné une réduction significative de la taille de la plaque VZV. (Fig. 3)

Depuis des siècles, le miel est utilisé en médecine traditionnelle. Dans un passé récent, la communauté scientifique s'est beaucoup intéressée au miel pour explorer ses applications potentielles dans le traitement de diverses affections cliniques. Le miel possède un large éventail de propriétés thérapeutiques, notamment une activité anti-inflammatoire, antibactérienne, antifongique et antinéoplasique. Nos résultats suggèrent la présence dans le miel de composés possédant une activité anti-VZV, dont l'identité reste à déterminer. Le miel est pratique pour l'application sur la peau, facilement disponible et peu coûteux, et potentiellement un excellent remède pour traiter les éruptions cutanées dues au zona dans les pays en développement où les médicaments antiviraux sont chers ou difficilement disponibles.

Etude réalisée par :

Aamir Shahzzad du Département de neurologie, Université du Colorado Denver, Anschutz Medical Campus, Aurora, CO, USA.
Randall J Cohrs du Département de biologie structurale et computationnelle, Université de Vienne, Vienne, Autriche.

Source de l'étude : US National Library of Medicine / National Institutes of Health

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